ایجاد پلاک توسط سویه V4ویروس عامل بیماری نیوکاسل بر روی کشت سلولی و بررسی مولکولی با روش واکنش زنجیره پلیمراز نسخه‌برداری معکوس RT-PCR))

نویسنده

  • ساناز سبحانی، محمدجواد مهربانپور . .
چکیده مقاله:

امروزه در بسیاری از کشورهای دنیا واکسن کلون شده مورد استفاده قرار می‌گیرد. جهت کلون کردن یک ویروس، یکی از راه‌ها رشد ویروس بر روی کشت سلول و جدا کردن پلاک‌های مجزا و متفاوت و بررسی آنها از لحاظ مورفولوژی و ژنتیکی است. دراین تحقیق، ابتدا سلول‌های ) Madin-Darby Canine Kidney  MDCK) بصورت  تک لایه و بطور استاندارد کشت داده شد. رقت های مختلف ویروس به سلول‌های تک لایه MDCK همراه با تریپسین، آگار و سولفات منبزیوم اضافه شد. ویروس توانست بر روی سلول‌های فوق تکثیر و ایجاد اثر سایتوپاتیک (CPE) و  پلاک نماید. در رقت  6-10 تعداد 6 پلاک که از لحاظ شکل و اندازه تفاوت داشتند برداشته شدند و جهت تکثیر به تخم‌مرغ جنین دار 11-9 روزه تلقیح گردید. بعد از 48 ساعت مایع آلانتوئیک هر تخم‌مرغ حاوی پلاک برداشت ونسبت به جداسازی RNA هر پلاک اقدام گردید. منطقه شکست  (Cleavage site)پروتئین ادغامی(Fusion)  با تست RT-PCR  انجام شد و محصول PCR خالص‌سازی وسکانس گردید. سکانس نوکلئوتیدها و آمینواسیدها برای هر پلاک با سوش های ثبت شده در بانک ژنی مقایسه شد. سکانس نوکلئوتیدهای تمامی پلاک‌های بدست آمده، 97 تا 99% همخوانی با ویروس  V4در بانک ژنی را تایید نمود. هدف از این پژوهش ایجاد پلاک از سوش V4 ویروس نیوکاسل بر روی سلول‌های MDCK   جهت ایجاد پلاک‌های مجزا و در نهایت بررسی مولکولی پلاک‌های ایجاد شده می‌باشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

مقایسه تشخیص عفونت سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی به روش کشت سلولی و روش مولکولی واکنش زنجیره ای پلمیراز (PCR)

مقدمه: عفونت سیتومگالوویروس، رایج ترین عفونت ویروسی در دوران بارداری می باشد. روش های متداول شناسایی این عفونت شامل: روش کشت ویروس، آزمون PCR و الایزا می باشد. مطالعه حاضر با هدف ارزیابی و مقایسه روش کشت سلولی و روش مولکولی PCR در تشخیص عفونت های سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی انجام شد. روش‌کار: این مطالعه مقطعی در سال 91-1390 بر روی 110 زن با سابقه سقط غیر عمد در بیمارستان های آموزشی دانش...

متن کامل

شناسایی کلستریدیوم سپتیکوم به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)

li . a3"9rl aiL,;.61'l,.lo95g9s,r";lo.r;'l,q,Jtaer{J*-;*J5O+.t1r (PCR) al:9, .,rat5':.1"ri+.ltL" : g rb .a991la.iL;.5$.ir 95 2g;,r, A 9; *a llo'r,il.spyl.;-*l5ar-9ulA :ba!9al u9fe,rrl.lhrl ol..id4jlpbd I . 6.r^ir95o;U g9s'tn 31 6 tl ty. * y; : t;' 9 t l, PCR pt+l .bte-;IDNA 6l.g*l ,LJ:.1;"-J5d;t h+i5lt.#t^i .A.J'-6Jij j4'f.i 1l o'& u>lp uet a3l.5b.rol;;l osl'i;rl {f fupt{tl*J5 t;*Sl 9a:-...

متن کامل

مقایسه حساسیت دو روش RT-PCR و RRT-PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. روش کار: استخراج RNA با استفاده از کیت RNease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. RNA استخراج شده ...

متن کامل

شناسایی مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا به روش واکنش زنجیره پلیمراز بر مبنای ژن ligb

زمینه: لپتوسپیروز بیماری عفونی می باشد که به عنوان مهم ترین بیماری زئونوز شایع در جهان مطرح شده است. ligbیکی از مهم ترین پروتئین های غشاء خارجی لپتوسپیرا می باشد، ایمونوژن می باشد و تنها در لپتوسپیراهای بیماری زا وجود دارد. هدف این پژوهش تشخیص مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا به روش pcr بر مبنای ژن ligb می باشد. مواد و روش ها: در این بررسی از پنج سرووار بیماری زای لپتوسپیرا و یک سرووار غیر بیماری...

متن کامل

مقایسه تشخیص عفونت سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی به روش کشت سلولی و روش مولکولی واکنش زنجیره ای پلمیراز (pcr)

مقدمه: عفونت سیتومگالوویروس، رایج ترین عفونت ویروسی در دوران بارداری می باشد. روش های متداول شناسایی این عفونت شامل: روش کشت ویروس، آزمون pcr و الایزا می باشد. مطالعه حاضر با هدف ارزیابی و مقایسه روش کشت سلولی و روش مولکولی pcr در تشخیص عفونت های سیتومگالوویروس در سقط های خودبخودی انجام شد. روش­کار: این مطالعه مقطعی در سال 91-1390 بر روی 110 زن با سابقه سقط غیر عمد در بیمارستان های آموزشی دانشگ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 13  شماره شماره 1(پیاپی 52)

صفحات  1841- 1848

تاریخ انتشار 2016-03-20

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023